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Nanophotometer?是利用樣品壓縮法進行濃度測量的多功能儀器，廣泛應用于生命科學和生物醫(yī)藥領域。由于壓縮法具有良好的樣品兼容性，特別適合于各類蛋白質(zhì)樣品的定量，無論是純化蛋白、總蛋白、肽段樣品或混合樣品，均有對應的方法學支持。您可根據(jù)應用要求，選擇合適的機型進行蛋白質(zhì)的定量分析，獲得可靠的結(jié)果。
UV280法 – 純化蛋白定量金標準
對于具有確定消光系數(shù)的純化蛋白，基于芳香族典型氨基酸的紫外吸收，UV280法可以非常準確的進行濃度測量，也是Nanophotometer?最常用的應用之一。使用UV280法時，應避免較強吸收物種的干擾，如裂解液RIPA成分。而對于消光系數(shù)未知的樣品，也可使用OD1法進行相對濃度測量或估算。設備內(nèi)置了常用蛋白質(zhì)的消光系數(shù)，可以直接調(diào)用，也可以自定義消光系數(shù)，您可訪問Implen官網(wǎng):
https://www.implen.de/protein-uv-spectrophotometer/
輸入蛋白質(zhì)的氨基酸序列，進行消光系數(shù)的計算。
四種標準曲線方法
Nanophotometer?可進行四種蛋白質(zhì)標準曲線法的分析（各型號有差異），分別為BCA、Bradford、Lowry和Biuret （僅支持比色皿測量），可通過對應的試劑盒與蛋白樣品進行反應，通過標準曲線計算蛋白濃度，適用于總蛋白及純化蛋白的定量。Nanophotometer?不同機型的掃描波長在200-650nm或200-900nm，涵蓋了可見光區(qū)吸收的應用。標準曲線支持存儲及直接調(diào)用，即使是單通道的機型也能便捷的進行標曲法蛋白定量。而N120高通量機型則支持標準曲線的多通道測量，可大幅提升測量效率。
A205肽鍵吸收法 – 寡肽定量
對于缺少芳香族典型氨基酸的寡肽和肽段樣品，由于無吸收峰，UV280法可能不適用。此時可使用UV205法測量肽鍵的半峰吸收，獲得樣品的吸光值和濃度。近紫外區(qū)的測量對于超微量分光光度計而言具有挑戰(zhàn)性，容易受到檢測器和光學系統(tǒng)噪聲及漂移的影響。Nanophotometer?具有出色的光學系統(tǒng)和4096CMOS陣列檢測器配置，可確保在全波長范圍內(nèi)的測量準確性。
公式法 – 混合物中蛋白定量
一些樣本中除蛋白質(zhì)外還包含其他在280nm處有吸收的組分，可通過校正系數(shù)及公式進行其中蛋白濃度的測量，如含有核酸的樣本，可使用經(jīng)驗公式：蛋白質(zhì)濃度=1.45×A280－0.74×A260。也可通過純品的測量，確認A280的校正系數(shù)，進行干擾組分吸光值的扣除。Nanophotometer?可進行公式創(chuàng)建，滿足混合物中蛋白定量的應用需求。
獨特的樣品壓縮技術(shù)使Nanophotometer?區(qū)別于同類產(chǎn)品，蛋白質(zhì)樣品由于溶質(zhì)和溶劑成分、粘度等因素的影響，往往會降低表面張力而不易被測量，而這恰恰令樣品壓縮法能夠大顯身手。設備具備豐富的蛋白質(zhì)測量應用程序及方法學設定，還具備背景校正和樣品質(zhì)量控制功能。僅需微升級樣品，即可獲得紫外-可見全光譜吸收數(shù)據(jù)，包括蛋白及偶聯(lián)物的同時分析。從生物醫(yī)學到藥物研發(fā)，從結(jié)構(gòu)生物學到交叉學科，Nanophotometer?是蛋白質(zhì)定量的理想工具。
