摘要

本文案例分析了Thermo Scientific Varioskan LUX多功能酶標(biāo)儀（以下簡(jiǎn)稱Varioskan LUX）及其氣體控制模塊在細(xì)胞動(dòng)力學(xué)測(cè)量中的應(yīng)用。通過(guò)這項(xiàng)技術(shù)，研究者能夠在控制CO2和O2濃度的環(huán)境中進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)力學(xué)分析，從而提高了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和效率。

Varioskan LUX多功能酶標(biāo)儀

Varioskan LUX是一款多功能酶標(biāo)儀，能夠進(jìn)行吸光度、熒光強(qiáng)度、化學(xué)發(fā)光、時(shí)間分辨熒光和AlphaScreen等五功能檢測(cè)。其氣體控制模塊能夠同時(shí)控制CO2和O2水平，為細(xì)胞培養(yǎng)提供一致的生理?xiàng)l件。

技術(shù)背景

在藥物和學(xué)術(shù)研究中，基于細(xì)胞的檢測(cè)通常需要精確控制CO2和O2的濃度。Varioskan LUX的集成氣體控制模塊可以在長(zhǎng)時(shí)間動(dòng)力學(xué)研究中維持細(xì)胞培養(yǎng)的生理?xiàng)l件，確保數(shù)據(jù)的連續(xù)性和準(zhǔn)確性。

▲Variskan LUX 多功能酶標(biāo)儀中的氣體濃度

在SkanIt軟件中很容易被調(diào)整和監(jiān)控

 ▲Nunc Edge?96孔板帶有填充的邊緣，

可作為被動(dòng)濕度控制

實(shí)驗(yàn)方法

細(xì)胞在37℃和5% 的CO2條件下根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)程序培養(yǎng)并傳代，使用細(xì)胞培養(yǎng)箱（Thermo ScientificTMHeracellTM150）進(jìn)行培養(yǎng)。每孔含1000個(gè)細(xì)胞，用90微升培養(yǎng)基接種到兩個(gè)96孔板中；在加入PrestoBlue試劑（10微升）前，先在培養(yǎng)箱中孵育2小時(shí)。

PrestoBlue試劑是一種即用型細(xì)胞可滲透的瑞沙脲基溶液，它利用活細(xì)胞的還原能力作為細(xì)胞活力指示劑，定量測(cè)量細(xì)胞增殖。當(dāng)加入到細(xì)胞時(shí)，PrestoBlue試劑被活細(xì)胞的還原環(huán)境修飾并高度熒光化。這種顏色變化可以通過(guò)熒光來(lái)檢測(cè)。

在測(cè)量室中保持溫度為37℃，CO2濃度為5%，用Varisikan Lux儀器每小時(shí)測(cè)一次熒光（激發(fā)波長(zhǎng)560nm，發(fā)射波長(zhǎng)590nm，底讀），測(cè)72小時(shí)。 同時(shí)進(jìn)行未控制CO2水平的實(shí)驗(yàn)作為對(duì)照。

▲有或沒(méi)有CO2控制的情況下，在Varioskan LUX儀器中進(jìn)行了HeLa細(xì)胞72小時(shí)的動(dòng)力學(xué)生長(zhǎng)研究。繪制了熒光值減去基線48個(gè)重復(fù)的平均曲線圖。

▲在為期72小時(shí)的測(cè)量期間，VarisKan LUX儀器中的二氧化碳含量保持穩(wěn)定。SkanIt軟件在每個(gè)測(cè)量的運(yùn)行日志中記錄氣體濃度。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在Varioskan LUX儀器中控制CO2水平對(duì)于長(zhǎng)時(shí)間動(dòng)力學(xué)細(xì)胞檢測(cè)至關(guān)重要。使用PrestoBlue試劑，研究者能夠監(jiān)測(cè)活細(xì)胞在72小時(shí)生長(zhǎng)期內(nèi)的增殖情況。結(jié)果顯示，在CO2控制條件下的HeLa細(xì)胞顯示出顯著的增殖，而在未控制CO2的條件下，熒光信號(hào)變化不顯著。

結(jié)論

Varioskan LUX的集成氣體控制模塊為細(xì)胞動(dòng)力學(xué)測(cè)量提供了多項(xiàng)優(yōu)勢(shì)，包括節(jié)省實(shí)驗(yàn)臺(tái)空間、無(wú)數(shù)據(jù)間隙、通過(guò)SkanIt軟件輕松調(diào)整氣體濃度、同時(shí)或分別控制CO2和O2、良好的氣體濃度穩(wěn)定性以及運(yùn)行時(shí)氣體濃度記錄的可追溯性。

應(yīng)用案例分析

Varioskan LUX多功能酶標(biāo)儀在細(xì)胞動(dòng)力學(xué)測(cè)量中的應(yīng)用，展示了其在生物醫(yī)學(xué)研究中的高效性和實(shí)用性。通過(guò)精確控制細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境，研究者能夠獲得更可靠和準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，從而推動(dòng)科學(xué)發(fā)現(xiàn)。