超微量分光光度計(jì)是核酸和蛋白定量的常用工具，在日常使用過(guò)程中，空白測(cè)量是在樣品測(cè)量前所必須的步驟。正確的理解什么是NanoPhotometer?或任何其他超微量分光光度計(jì)上的空白測(cè)量，以及空白讀數(shù)對(duì)工作流程和結(jié)果產(chǎn)生的影響，是保障儀器正確操作和獲得可靠結(jié)果的基礎(chǔ)。

對(duì)于雙光束紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)而言，空白與樣品測(cè)量在空間上分開(kāi)，扣除空白后得到樣品的吸光值。而超微量分光光度計(jì)通常采用單光束設(shè)計(jì)，空白與樣品測(cè)量需要在時(shí)間上分開(kāi)，在進(jìn)行空白測(cè)量后，得到表征光源強(qiáng)度的基線(xiàn)，然后樣品的測(cè)量值扣除空白測(cè)量值得到樣品的吸光值。在實(shí)際測(cè)量過(guò)程中，在一次空白測(cè)量之后，只要樣品的溶劑成分不變，可以連續(xù)地測(cè)量多個(gè)樣品，結(jié)果的計(jì)算都基于初始空白值的扣除。然而，空白基線(xiàn)的穩(wěn)定是否受時(shí)間影響呢？即多久做一次空白，可以確定樣品的吸光值和濃度準(zhǔn)確可靠呢？

由于超微量分光光度計(jì)通常使用氙閃燈光源，作為一種閃爍點(diǎn)亮的冷光源，其穩(wěn)定性是非常好的，基線(xiàn)的穩(wěn)定性通常在1小時(shí)內(nèi)可保持在0.002-0.003A（10mm光程）之內(nèi)的波動(dòng)水平，如果將光程因子計(jì)算在內(nèi)，相當(dāng)于1-2ng/μl dsDNA的濃度水平。對(duì)于常規(guī)濃度的樣品而言，這個(gè)誤差的引入幾乎可以忽略，也不會(huì)反映在重復(fù)性之上。因此，對(duì)于一般性實(shí)驗(yàn)，在起碼一小時(shí)內(nèi)，空白測(cè)量是不用重新進(jìn)行的（在樣品臺(tái)清潔的情況下）。而對(duì)于低濃度樣品和一些流程嚴(yán)格控制的實(shí)驗(yàn)而言，基線(xiàn)隨時(shí)間的波動(dòng)將引入值得關(guān)注的測(cè)量不確定度，可能產(chǎn)生可觀的示值誤差，但對(duì)重復(fù)性的影響較小。因此，對(duì)于一些特殊樣品，空白測(cè)量與樣品測(cè)量不宜間隔較長(zhǎng)的時(shí)間，以減小風(fēng)險(xiǎn)，甚至可能每個(gè)樣品都重新做空白。

NanoPhotometer?在每次開(kāi)機(jī)時(shí)都會(huì)對(duì)光源強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)，初始化通過(guò)即代表光源已進(jìn)入工作狀態(tài)。在使用過(guò)程中，也可以通過(guò)光譜診斷功能，實(shí)時(shí)地進(jìn)行光源性能檢查?？瞻诇y(cè)量和基線(xiàn)穩(wěn)定性對(duì)于超微量而言是重要的，不少日常使用中出現(xiàn)的問(wèn)題都源自于空白和基線(xiàn)漂移。除了設(shè)備自身的診斷功能之外，定期的進(jìn)行設(shè)備的基線(xiàn)穩(wěn)定性檢查也有助于判斷和基線(xiàn)有關(guān)的部件是否正常，如光源、光學(xué)路徑和檢測(cè)器。

Implen通過(guò)樣品壓縮法實(shí)現(xiàn)了測(cè)量時(shí)間的大幅縮短，使光源的壽命延長(zhǎng)至10年以上，在這個(gè)基礎(chǔ)上，進(jìn)一步增強(qiáng)了光線(xiàn)的強(qiáng)度控制和穩(wěn)定性。而出色的光學(xué)路徑設(shè)計(jì)和高性能通光材料的使用，也確定了基線(xiàn)波動(dòng)在很小的范圍內(nèi)。在實(shí)際使用過(guò)程中，用戶(hù)根據(jù)樣品的實(shí)際情況和實(shí)驗(yàn)允差要求，制定合理的空白測(cè)量頻率，可在確定可靠性的同時(shí)提高實(shí)驗(yàn)效率。